大组织透明化样品可以通过悬挂的方式放置在样品载物台上,样品大尺寸是1cm*1cm*1cm。
适合样品:水溶性试剂透明化的小鼠胚胎、脑、肺、肝脏、肾脏、胰腺、卵巢等。
上样方式:平台配有不同形式的样品粘托和样品托盘,可以将样品通过粘贴悬挂或者托挂的方式放置在载物台上,没有固定形式,大家集思广益。
由于高浓度的琼脂糖浓度会影响部分活体样本的发育和状态,琼脂糖浓度太低又会影响样品的稳定性,此时,我们可以选择将样品围封在FEP管中。
适合样品:折射率和FEP、琼脂糖相似的样品,如斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等。
样品大小:平台配有不同规格的FEP管,具体围封方式类似于包埋方式。
围封样品模式图
扫描电镜图像的形成需要各个系统相互配合,电子光学系统为扫描电镜提供的电子束,信号探测系统将电子束与样品相互作用产生的信号进行采集与处理。电子光学系统内容请参考往期文章,本篇主要对扫描电镜的信号探测系统进行介绍。
扫描电镜可以采集多种不同类型的信号用于成像和分析,其中二次电子(SE)和背散射电子(BSE)信号是基本也是常见的两种信号类型。
不同厂家和型号的电镜在采集SE,BSE信号时所用的探测器都具有各自特的技术,但旁置式二次电子探测器和极靴下背散射电子探测器在架构和工作原理方面相对固定,应用也很广泛,因此本文只会对旁置式二次电子探测器和极靴下背散射电子探测器进行介绍。
蔡司热场发射扫描电子显微镜SIGMA 500采用Gemini电子束非交叉光路设计,突破了传统设计中电子束交叉三次造成能量扩散的限制。束流适中,大大降低了色差对成像质量的影响。镜头镜筒内置电子束加速器,无需切换减速模式即可实现的低电压成像。低20V可成像,样品类型不受限制。透镜镜筒物镜采用静电透镜和电磁透镜相结合的方式,在工作距离范围内没有磁场,可在高倍率下观察磁性材料。环形二次电子探测器In-Lens安装在镜筒的正光路上。圆柱形一体化超大样品室配备5轴全自动中心样品台,可容纳直径250mm的超大样品。同一品牌的电子显微镜和光学显微镜可以组合观察(可选),只有一个通用的样品架和配套的软件是Shuttle&Find,可以充分发挥光镜和电子镜各自的优势
使用全新样品定位方法创建多视角( Multiview) 数据
使用折射率 n=1.38 的 Scale 介质(Hama 等,Nat Neurosci 期刊,2011 年),或折射率 n=1.45 的水性澄清液(例如:CelExplorer Labs 公司生产的 FocusClear™ 产品)进行透明处理的组织来完成实验
使用可选的触发界面维持生理条件,充分发挥成像信息和环境条件控制两者相结合的优势
光透技术